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- Publisher
- Karger
- Copyright
- © 1949 S. Karger AG, Basel
- ISSN
- 1015-2008
- eISSN
- 1423-0291
- DOI
- 10.1159/000159769
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Abstract
R e c h e r c h e s s u r le s p r o t é i n e s d u C e sto d e M o n ie zia e x p a n s a . II. — Etude de la digestibilité des diverses fractions protéiques par la Trypsine. Par N. KENT et M. MACHEBŒUF Dans une série de notes dont la dernière fut publiée récem ment (1) nous avons montré la possibilité d’extraire d’un Cestode une série de fractions protéiques bien différenciées. La plupart de ces fractions contiennent en proportions élevées des substances non protéiques intimement associées aux protéines : glycogène, acides biliaires et cérébrosides. Une fraction désignée par la lettre n est extraite par l’eau distillée, puis précipitée par dialyse ; elle est constituée par des cénapses protéines-cérébrosides-acides biliaires. La dialyse laisse en solutions d’autres protéines que nous avons subdivisées par relargage au moyen de sulfate d’ammonium (44,6 p. 100 à pH 6,5). Le précipité est très riche en glycogène et se subdivise par électrophorèse en deux parties homogènes l’une et l’autre à l’électrophorèse ; ces deux parties contiennent l’une et l’autre du glycogène lié à des protéines. La fraction dont la mobilité est la plus grande à pH 7,15 fut dénommée Moniezine ; elle contient 20 p. 100 de glycogène. L’autre dénommée Baérine en contient 60 p. 100. D’autres protéines résistent aux extractions, par l’eau, des vers délipidés et ont été extraites par d’autres solvents. Il s’agit surtout de nucléotides. Nous nous occupons aujourd'hui seulement des fractions, Moniezine et Baérine. Les protéines de ces fractions ne sont pas libres, mais cénap- sées et nous avons pensé que ce fait influait peut-être sur leur digestibilité p ar les enzymes du contenu intestinal de l’hôte. Il se pouvait même que le fait d’être ainsi cénapsées protège les protéines du ver de l’action protéolytique. R eçu : 4. 5. 1948. P ath o lo g ie und B akteriologie, Vol. XII, F ase . 1 (1949) 7 K en t et M a c h e b œ u f , R ech erch es s u r les p ro té in e s 8 2 Conditions expérimentales. La préparation de trypsine utilisée était commerciale, de marque « Judex », son activité était très élevée. Les protéines furent placées en présence de trypsine dans une solution tampon (phosphates M/30) de pH 8,02 saturée en toluène. La température fut maintenue ù 37° C. dans un bain d’eau thermostatique. On utilisait dans chaque cas 2 mg. de trypsine « Judex » pour 30 mg. de protéines (en tenant compte toujours de la teneur en substances non protéiques de chaque fraction). La protéolyse fut suivie par la méthode de Van Slyke (2) en effectuant un dosage chaque jour. Dans le cas de la fraction ar, dont la délipidation est possible par alcoolyse à chaud, nous avons effectué comparativement l’hydrolyse trypsique sur la fraction non délipidés et sur un échantillon préalablement débarrassé de ses cérébrosides et de ses acides biliaires par un traitement pro longé à l’alcool absolu bouillant. Dans le cas des cénapses protéines-glycogène (Baérine et Mo- niezine) il ne nous a pas encore été possible d’arracher le glyco gène sans liydrolyser, au moins partiellement, la protéine. Aussi avons-nous dû nous contenter d’étudier l’action de la trypsine sur les cénapses protéines-glycogène sans pouvoir étudier com parativement les protéines isolées. 1° Fraction n : Quantité de protéines mises en œuvre dans chaque cas : 4,3 milligrammes d’azote protéique (29 mg. de protéine délipidée ou 48 mg. de fraction non délipidée). N d o sé p a r m é th o d e van S lyke F r a c tio n D u ré e de l ’h y d r o ly s e tr y p s iq u e F ra c tio n n o n d é lip id é e d é lip id é e Témoin au départ (0 heure) 0,14 0,14 87 heures 3,8 mg. 1,75 mg. 113 heures 4,0 » 2 , 0 » 137 heures 4,1 » 2 , 0 » 161 heures 4,1 » 2 , 0 » La présence des lipides semble favoriser considérablement l’hydrolyse trypsique qui libère 95 p. 100 de l’azote sous forme dosable par la méthode de Van Slyke. Pour les protéines délipidées par l’alcool bouillant l’hydrolyse est beaucoup moins intense et n ’atteint même pas 50 p. 100 de du Cestode m onk'zia expansa 6 3 l’azote. Ce fait est très curieux, car habituellement les protéines dénaturées par l’alcool chaud sont plus facilement hydrolysées par la trypsine que les protéines naturelles. Fait plus curieux encore : les protéines liées aux lipides sont beaucoup plus com plètement hydrolysées par la trypsine que les mêmes protéines préalablement traitées par l’alcool. Nous ne pouvons pas donner d’interprétation de ce phéno mène mais nous pouvons en tout cas conclure que les cérébrosides et les acides biliaires liés aux protéines dans la fraction n ne peuvent pas être invoqués comme protecteurs de ces protéines vis-à-vis de la trypsine de l’intestin de l’hôte. 2° Fractions Baérine et Moniezine : Comme la séparation de ces fractions ne peut être obtenue que par électrophorèse et comme nous ne disposons pas d ’un appareil convenable pour séparer des quantités suffisantes par électrophorèse, nous nous sommes contentés d’expérimenter sur le mélange de Baérine et de Moniezine tel qu’il est obtenu par relargage au moyen de sulfate d’ammonium à 44,(5 p. 100 à pH 6,5. Ici la quantité de protéines mise en œuvre pour chaque ex périence correspondait à 3,2 mg. d’azote. D u ré e d e l ’h y d ro ly s e tr y p s iq u e M élange B a é rin e et M o n ie z in e N d o sé p a r Van S t y k e 0 heure 0,77 20 heures 1,59 mg 44 heures 1,62 » 69 heures 1.65 » 1.66 » 90 heures En somme, l’hydrolyse s’arrête après 20 heures et ne porte que sur 37 p. 100 environ de l’azote protéique que libérerait la trypsine si l’hydrolyse était totale. Nous retrouvons ici une limite inattendue à l'action de la trypsine. Conclusions. Les cérébrosides et les acides biliaires liés à certaines pro téines du Cestode n ’empêchent pas ces protéines d’être hydro lysées par la trypsine, ils favorisent même l’hydrolyse. P ar contre les fractions protéiques riches en glycogène (Monie- K e n t et M a c h e 1» œ u f . Recherches sur les proteines . . . 8 4 zine et Baérine) résistent d’une façon surprenante à la trypsine qui ne parvient pas à rendre titrable par la méthode de Van Slyke plus de 37 p. 100 de leur azote. Zusammenfassung. Die an gewisse Cestodenproteine gebundenen Cerebroside und Gallensäuren vermögen die Trypsinhydrolyse nicht zu verhindern, sondern scheinen sie noch zu begünstigen. Demgegenüber erwei sen sich die glykogenreichen Proteinfraktionen (Moniezine und Baerine) dem Trypsin gegenüber auffällig resistent, vermag es doch für die Van Slykesehe Methode nicht mehr als 37% des N. titrierbar zu machen. Riassunto. Cerebrosidi ed acidi biliari legati a certe proteine di Cestodi, sembrano favorire anzicché ostacolare l’idrolisi della Tripsina. Al contrario frazioni di Proteina rieche in glicógeno (Moniezine e Baerine) si mostrano verso la Tripsina di una resistenza sor prendente, è possibile tutlavia di rendere titolabile per ii método di Van Slyke non piú del 37% di N. Summary. The cerebrosides and bile acids linked to certain proteins from cestode worms are not able to prevent their hydrolysis by tryp sin, they rather seem to enhance it, whereas Moniezine and Bae rine, two glycogene containing protein fractions exhibit a re markable resistance toward trypsin. Only 37 percent of their amino-acid nitrogene can he titrated in the hydrolysate by Van Slyke’s method. Bibliographie. 1. N . K e n t et M. Ma ch eb oeu f — E x p e ric n tia 1948, 4, 193. — 2. Van S l y k e — J. B iol. C hem . 1912, 12, 275.
Journal
Pathobiology – Karger
Published: Jan 1, 1949